Produção de Enzima para RT-LAMP

Porção maior da Enzima DNA Polimerase I de Geobacillus stearothermophilus – Bst-LF

Equipe técnica:

Katlin Brauer Massirer, Lucas Souza, Ítalo Esposti Poly da Silva, Gabriel Vieira, Mario Bengtson e Paulo Arruda

Captação e edição de imagens:

Fulvia Di Pillo

Equipe de comunicação:

Paula Drummond e Daniel Pompeu

 

A sequência gênica da porção maior da Enzima DNA Polimerase I de Geobacillus stearothermophilus (Bst-LF) (MILLIGAN et al., 2018; BHADRA et al., 2021) foi adquirida comercialmente de repositório de plasmídeos (Addgene, Plasmid #145799) e transferida para o vetor pNic28-Bsa4 através da técnica de clonagem independente de ligação (LIC) (ASLANIDIS et al., 1990; STRAIN-DAMERELL et al., 2014). A Bst-LF foi expressa em sistema heterólogo bacteriano de acordo com protocolos amplamente utilizados para produção de proteínas recombinantes em escala média (BURGRESS-BROWN et al., 2014; TOSARINI et al, 2018), e as etapas de purificação utilizadas adaptadas de Burgree-Brown et al. (2014), Milligan et al. (2018) e Tosarini et al. (2018).

Faça o download dos protocolos completos em texto no link:

Protocolos Expressão e Purificação – Anexo FINAL

Protocolos em vídeo: